ጂን ወደ ፕላዝሚድ እንዴት ማስገባት ይቻላል?

2024 ደራሲ ደራሲ: Stanley Ellington | [email protected]. ለመጨረሻ ጊዜ የተሻሻለው: 2024-01-18 08:14

መሰረታዊ ደረጃዎች የሚከተሉት ናቸው:

1. ክፈቱን ይቁረጡ ፕላዝማድ እና በ ውስጥ "መለጠፍ". ጂን . ይህ ሂደት በእገዳ ኢንዛይሞች (ዲኤንኤ የሚቆርጡ) እና የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ (ዲ ኤን ኤ ይቀላቀላል) ላይ የተመሰረተ ነው።
2. አስገባ የ plasmid ወደ ባክቴሪያዎች.
3. ብዙ እደጉ ፕላዝማድ - ባክቴሪያ ተሸክመው ፕሮቲኑን ለመሥራት እንደ "ፋብሪካ" ይጠቀሙባቸው።

እንዲሁም ጂን እንዴት ወደ ፕላዝሚድ ጂሲኤስኢ ሊገባ ይችላል?

ነው በፕላዝሚድ ውስጥ ገብቷል ligase ኢንዛይሞችን በመጠቀም. የ ፕላዝማድ ይሄዳል ወደ ውስጥ የባክቴሪያ ሕዋስ. ትራንስጀኒክ ባክቴሪያው ይራባል፣ በዚህም ምክንያት ውስጥ የሰው ኢንሱሊን የሚያመነጩ በሚሊዮን የሚቆጠሩ ተመሳሳይ ባክቴሪያዎች።

በተጨማሪም፣ እንዴት ነው ጂንን የሚሰርቁት? መሰረታዊ እርምጃዎች ለ Subcloning ማስገባትዎን ከወላጅ ቬክተር ይለቃሉ እና ያፀዳሉ፣ይህን ማስገቢያ ወደተዘጋጀ የመድረሻ ቬክተር ያሰራጩ፣ይህን የሊጅሽን ምላሽ ወደ ብቁ የባክቴሪያ ህዋሶች ይለውጡት። ከዚያ የተቀየሩትን ህዋሶች ለመክተት ያያሉ።

ይህንን ከግምት ውስጥ በማስገባት የጂን ክሎኒንግ 4 ደረጃዎች ምንድ ናቸው?

በክላሲካል ገደብ ኢንዛይም መፈጨት እና ligation ክሎኒንግ ፕሮቶኮሎች ውስጥ የማንኛውም የዲኤንኤ ክፍልፋይ ክሎኒንግ በመሠረቱ አራት ደረጃዎችን ያካትታል።

• የፍላጎት ዲ ኤን ኤ ማግለል (ወይም ዒላማ ዲ ኤን ኤ) ፣
• ligation,
• ሽግግር (ወይም ለውጥ), እና.
• የማጣሪያ/የምርጫ ሂደት።

ፕላዝማይድን እንዴት ማጉላት ይቻላል?

የሙከራ ሂደት

1. PCR ን ያሂዱ እና የ PCR ምርቱን ያፅዱ፡ ያስገቡትን ዲኤንኤ ለመጨመር PCR ን ያሂዱ።
2. የእርስዎን ዲ ኤን ኤ ይሰብስቡ፡-
3. ማስገባትዎን እና ቬክተርዎን በጄል ማጥራት ይለዩ፡
4. ማስገባቱን ወደ ቬክተርዎ ያስተካክሉት፡
5. ለውጥ፡-
6. የተጠናቀቀውን ፕላዝሚድ ይለዩ፡
7. የእርስዎን ፕላዝሚድ በቅደም ተከተል ያረጋግጡ፡-